轉基因品系研制


轉基因技術是將人工分離和修飾過的基因導入到生物體基因組中,由于導入基因的表達,引起生物體的性狀產生可遺傳的修飾。顯微注射是制作轉基因斑馬魚過程中最常用的方法,它是在顯微鏡下將外源基因通過顯微注射導入斑馬魚受精卵,注射的外源基因能夠整合到斑馬魚受精卵的基因組中,從而建立可穩定遺傳轉植基因的轉基因品系。轉基因斑馬魚廣泛應用于遺傳學、發育生物學、細胞生物學、醫學、環境毒理學、水產育種學等研究領域。


轉基因斑馬魚制備技術服務合同—轉基因表達載體的構建

技術服務流程

1 分析客戶要求制備轉基因斑馬魚的基因信息,啟動子序列以及CDS序列

2 以基因組DNA為模板克隆啟動子序列

3以表達質?;蜃躌NA為模板,通過PCR或RT-PCR,按客戶要求克隆目標轉基因斑馬魚的CDS(如GFP、YFP、mCherry或客戶特異基因)

4 對SV40 intron 和PolyA進行克隆

5 將上述克隆元件依次重組至Tol2轉座載體

轉基因斑馬魚制備技術服務合同—轉基因斑馬魚的建立(F1代)

技術服務流程

1 體外轉錄轉座酶

2 將轉座酶和Tol2轉基因表達載體,利用顯微注射技術,注射到1-細胞期斑馬魚受精卵

3 將注射后的斑馬魚受精卵孵育生長,作為轉基因斑馬魚建立的FO代

4 在FO代生長至性成熟時,將每尾F0個體分別與異性別野生型性成熟個體交配,收集F1胚胎

5 當F1生長至2月齡,提取尾鰭基因組,進行基因型鑒定,篩選確定轉基因魚F1。

                     


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